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    定量PCR(qPCR)是一种在PCR反应中实时监测核酸扩增产物的方法。为什么qPCR提RNA不提DNA?RNA更能反映gene的表达水平 依据中心法则,细胞内的DNA序列首先被转录成RNA分子,特别是信使RNA(mRNA),随后mRNA携带遗传信息,用于指导蛋白质的合成。mRNA的丰度和多样性是衡量基因表达水平的关键指标,它们直接关联到特定基因在特定时间和条件下的活性。与蛋白质相比,RNA的水平变化能够更快地反映基因表达的动态变化,因为RNA的稳定性相对较低,其水平变
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    专题一介绍了转录因子与靶基因启动子互作,本次介绍蛋白质与蛋白质互作预测。先上应用实操总结(同专题一总结类似,看过可忽略直接进入实操正文): 优点:利用AlphaFold3预测目的蛋白与候选蛋白互作,目前大概是生信预测类中最准确的方法。充分使用该工具,make it easier,会让互作机制研究会更容易些。建议结合其他生信分析网站,如PPI、BioGRID、IntAct,ComplexPortal等网站(干实验数据),或充分整合自己项目的CoIP-Mass或HuProt蛋白组芯片互作组数
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    ChIRP-Mass是一种检测细胞内RNA/蛋白互作组的高通量技术。该技术通过联合探针Pulldown共沉淀技术和质谱检测技术,对目的RNA在特定细胞/组织内的互作蛋白,进行系统的检测和分析。该技术适用于目的RNA在特定细胞/组织中的蛋白互作组数据检测,或用于不同遗传背景/实验条件下的互作组差异研究。因此,该技术是研究细胞内RNA互作调控网络的常规前置技术。 ChIRP-WB是一种检测细胞内RNA/蛋白互作的靶向验证技术。通过联合探针Pulldown共沉淀和Western Blot检
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    直奔主题,先上应用总结: 优点:利用AlphaFold3预测转录因子蛋白与靶基因启动子DNA互作,目前大概是生信预测类中最准确的方法。充分使用该工具,会让互作机制研究会更容易些,make it easier,和基云的服务理念一致。建议结合其他生信分析网站,如JASPAR、hTFtarget等网站(干实验数据),或充分整合自己项目的ChIP-Seq互作组数据(湿实验数据),进行初步分析,然后再用AlphaFold3进行预测验证,将会提高互作机制研究的成功率。 缺点:AlphaFold3毕竟是基
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    今天给小伙伴们分享的是PCR引物设计的8大原则,直接上干货,设计引物的时候,我们都需要考虑哪些因素呢? PCR引物设计的目的是确保PCR反应能够有效、特异性地扩增目标DNA序列。所以引物的好坏,直接关乎实验的成功。1 引物长度:18-30nt,通常以20nt左右最为常用。上下游引物的长度最好基本相等,最多相差不超过3bp。引物过短,易导致非特异扩增;较长的引物虽特异性好,但在引物内易形成二级结构,如发夹环。2 引物GC含量:40-60%,G+C比例太低
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    引文:该文的通讯作者是英国The University of Manchester(曼彻斯特大学)肿瘤研究所Tim Somervaille教授,该团队专注急髓白血病(AML)病理研究,聚焦AML分化的新药靶机理和医学转化。值得关注的是团队开发的新药靶赖氨酸脱甲基酶LSD1,其抑制剂已开展临床研究。进一步的转化结果,值得期待。本文是该团队于发表2023年11月22日发表在肿瘤Top期刊《Cancer Cell》上关于化药的药理文章。药物是临床试验中的化药CCS1477(Inobrodib),抑制靶点是乙酰修饰酶EP300/CBP
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    GCTrans-siRNA是一款新型、高效、低毒的siRNA专用转染试剂。其具有强大的siRNA承载能力,通过吸附内吞高效递送siRNA到细胞中,通过缓释发挥稳定的基因表达调控功能。 GCTrans-siRNA转染试剂适用于常规和难转染细胞的siRNA转染。转染后18-48小时可检测沉默效率,用于开展各种细胞学实验 GCTrans-siRNA与其它转染试剂相比,具有高效、稳定、低毒、耐血清优势。它的承载siRNA能力强、沉默效率高且性能稳定。其耐血清优势,在siRNA转染时仍可用完全培养基继续培
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    平时研究用的细胞,有需要冷冻保存。冷冻的过程称为冻存,和冻存对应的过程,称为复苏,通俗地说就是把冻上的细胞化开。 细胞复苏是一简单的试验操作,但操作中有许多需要注意的事项,在实验操作中注意细小问题,才能使复苏后的细胞状态保持良好。 下面小编就和大家分享细胞复苏的“避坑指南”。 细胞复苏的基本原则 快速融化:细胞复苏过程升温要快,防止在解冻过程中水分进入细胞,形成冰晶,影响细胞存活。 在复苏时,需要快速升
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    Janus激酶(JAK)信号转导和转录激活因子(JAK-STAT)途径是一种进化上保守的信号通路,由细胞因子刺激激活,使细胞外信号通过细胞膜传递到细胞核,引起DNA转录的改变,在几个关键的生理过程中发挥作用,包括造血、分化、代谢和免疫调节。在结构上,JAK-STAT途径涉及跨膜受体、受体相关的胞质酪氨酸激酶(即JAK)以及信号转导和转录激活因子(即STATs)。JAK蛋白家族包含四个成员:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。STAT家族由七个蛋白质组成:STAT1、STAT2、STAT3
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    单核细胞是血液中的一种白细胞,它们是免疫系统的一部分,可以分化成巨噬细胞或树突细胞。在实验室中,单核细胞通常通过从外周血中分离获得。直接上干货,以下是一个详细的单核细胞分离和获取的操作步骤: 材料和试剂: 外周血样本 无菌磷酸盐缓冲液(PBS) 密度梯度介质,如Ficoll-Paque™ 一次性无菌移液管 50 mL离心管 37°C水浴 离心机,能够进行低速和高速离心 试管架 无菌吸头 细胞培养基(如有需要) 操作步骤: 1 血液采集:外周血,通
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    实验室中常常使用的各类溶液种类繁多,且配制方法五花八门,是否挑花眼了呢?本文总结了近三十种常用溶液、缓冲液、培养基的配制方法,涵盖了分子生物学、蛋白分析、细胞培养、微生物培养等各个领域。 核酸电泳之 TBE、TAE 和 MOPS 缓冲液 三羟甲基氨基甲烷(Tris)是一种应用非常广泛的有机试剂。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备,可用于制作药物、有机合成、生物缓冲剂等。 用途:可以用于进行试剂的配制
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    有没有大佬有肿瘤干细胞成球实验的protocol呀,求
    gtuhdhuu 4-23
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    BECB往届会议吸引了超过200位参会者,涉及40多个国家和地区,分别是中国、新加坡、日本、韩国、英国、美国、乌克兰、加拿大、芬兰、意大利、法国、比利时、葡萄牙、德国、西班牙、埃及、泰国、越南、以色列、塞尔维亚、巴西、马来西亚、俄罗斯、捷克共和国、波兰、罗马尼亚、保加利亚、印度尼西亚、阿根廷、伊拉克、白俄罗斯、危地马拉、阿曼、菲律宾、约旦、尼日利亚、墨西哥、希腊、沙特阿拉伯、秘鲁等。 2024 3rd International Symposium on Bi
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    生物安全柜操作规范及维护保养 生物安全柜是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。是实验室生物安全中一级防护屏障中最基本的安全防护设备。 为规范生物安全柜的操作,本文从人员、使用环境、设备操作流程及注意事项等几个方面进行阐述,使操作人员能够正确使用生物安全柜。 使用人员与环境 1、首先,微生物检测人员需进行生物安全柜的使用培训才能进行操作,未经正规
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    生物安全柜操作规范及维护保养 生物安全柜是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。是实验室生物安全中一级防护屏障中最基本的安全防护设备。 为规范生物安全柜的操作,本文从人员、使用环境、设备操作流程及注意事项等几个方面进行阐述,使操作人员能够正确使用生物安全柜。 使用人员与环境 1、首先,微生物检测人员需进行生物安全柜的使用培训才能进行操作,未经正规
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    流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,但是如何配制。选择配制的方法不同,分析结果特别是保留时间,是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同,而产生流动
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    免疫荧光染色是实验室常用的技术之一,但在操作过程中,有许多需要注意的细节,任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项,并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择:选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体,一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验,一抗的浓度就较高),也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释:根据抗体说明书建议,使用合适的稀释液和稀释比例进行
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    免疫荧光染色是实验室常用的技术之一,但在操作过程中,有许多需要注意的细节,任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项,并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择:选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体,一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验,一抗的浓度就较高),也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释:根据抗体说明书建议,使用合适的稀释液和稀释比例进行
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    分子克隆实验——无缝克隆 今天和大家讲讲无缝克隆常见的问题以及解决方法。 1.平板上很少或者没有克隆菌落 建议使用试剂盒附带的阳性对照,可排除试剂盒本身的影响。进一步判定,主要有以下可能的情况和建议: 01载体制备 线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。 02插入片段制备 1、引物设计不正确:同源臂15~25nt(不计算酶切位点),CG含量40~60%。 2、线性化载体和插入片段的纯度不够,抑制反应。若线性化载体与插入片段已经过纯化,
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    菌种保藏是指保持微生物菌株的活力和遗传性状的技术。微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退。菌种保藏的目的就是使菌株存活、不丢失、不污染杂菌、不发生或少发生变异,保持菌种原有的活性和各种特征。菌种保藏的基本原理是使微生物的生命活动处于半永jiu性的休眠状态,也就是将微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。 实验室常用的保菌方法有:甘油保菌法、斜面保菌法、穿刺保菌法、液体
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    未来可期 www.huanova.com 市场推广主管(专员) 简历投递:hr@huanova.com 职位职责: 1、推进相关产品的市场调研及分析、市场策略的制定及执行相关工作; 2、制定年度公司产品的学术推广计划,并落实相关工作; 3、建立产品合理、科学的市场定位,并不断探索新的发展方向; 4、搜集并分析竞争产品的信息及策略,提出相应的应对政策和应对方法; 5、建立和维护相关专家网络,定期拜访; 6、 制定合理、可行的市场拓展计划,并协调实施,解决市场
    290575269 3-9
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    近年来,斑马鱼作为新型模式动物已广泛应用于发育生物学、遗传学和行为学等领域。它在神经系统功能和形态发育方面被认为是优秀的模型,尤其在研究神经退行性疾病方面表现突出。由于斑马鱼基因同人类基因相似,其简单而能支配复杂活动的神经系统成为研究运动、学习和记忆等行为学评价的理想选择。 T迷宫行为范式程序 斑马鱼T迷宫由两块透明的丙烯酸玻璃板拼接而成,由长臂和断臂两个部分组成。其中长臂长、宽和高分别是40cm、10cm和10cm
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    1 总述实时荧光定量PCR(后续简称为qPCR)顾名思义就是在PCR反应体系中加入荧光物质,通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程,由于其模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,以此为依据进而达到定量的目的。 简单来讲,qPCR可分为荧光染料法(以SYBR GreenⅠ最常用)与荧光探针法(TaqMan 探针)两种,而其结果分析方法也有绝对定量和相对定量之分。在此不一一赘述,此次分享以SYBR GreenⅠ法为例,结果分析选用相对定量法。 2 实验设计2.1 总
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    活性氧(ROS)的流式检测通常是通过使用荧光探针如DCFH-DA来监测细胞内活性氧水平的变化。以下是该检测方法的一些关键步骤和原理: 01选择荧光探针常用的荧光染料是DCFH-DA,它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化,生成发荧光的DCF。 02DCFH-DA是一种用于检测活性氧ROS的荧光探针,全称为2,7-二氯荧光素二乙酸酯。其工作原理为:DCFH-DA本身没有荧光,但可以自由穿过细胞膜,一旦进入细胞,它会被细胞内的酯
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    实验技能分享免疫荧光 免疫荧光(Immunofluorescence,IF)是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一种强大的技术。它的原理是利用荧光标记的抗体作为探针对组织或细胞内的特定抗原进行定位和定性的分析。IF是一个很好的检测技术工具,用于研究感兴趣的产物如分子、蛋白质或糖蛋白的表达、定位、分布和迁移。 免疫荧光检测方法 直接免疫荧光:携带荧光素的抗体直接与抗原反应,形成抗原—荧光素标记抗体复合物。该法优点是较
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    急性肺损伤( ALI) 是由于肺内外致病因素造成弥漫性炎性肺泡浸润、出血、肺水肿和透明膜形成,患者血氧结合能力降低为主的危急症候,严重者发展为急性呼吸窘迫综合征 。 在过去的二十年里,已经开发了几种治疗策略,并取得了显著的进展;然而,死亡率仍然很高,超过三分之一的患者死亡,一些幸存者由于长期低氧而出现脑损伤等并发症。目前 ALI 的病死率仍相当高,为 29%~42%,且与致病因素有很大关系;败血症的病死率约为43%,肺炎和误吸的
    metaphys 2-28
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    qPCR从样本采集到结果检出有很多的步骤,包括样本采集、样本保存、样本处理、样本检测、数据分析等一系列环节,不同的环节可以选择不同的对照进行监测,对照总体可分为阴性对照与阳性对照两类: 阴性对照 实验中经常遇到无法判断反应孔中的扩增信号是样本真实扩增还是污染扩增的情况,这就需要阴性对照来作为对比。常见的阴性对照有以下几种: ● 无模板阴性对照(No Template Control, NTC) NTC一般用纯化水代替,用以替代正常反应中的核酸样本
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    1细胞 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低,太少观察不到差异。 2.药物浓度的设定。一定要多看文
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    保持实验鼠的健康,对于实验结果的稳定性和可重复性至关重要。但在实际操作中,实验鼠由于各种原因导致感染的情况屡见不鲜。被细菌,病毒和体内外寄生虫感染的小鼠,不仅自身健康受到威胁,甚至还有可能传播给其他品系的小鼠,因此小鼠的净化非常关键和必要。 那小鼠的生物净化方式有哪些、应该如何选择? 什么时候需要净化? 遇到以下情况建议净化: 1.动物实验结果不稳定,重复性差,实验鼠已经确认受到病原体污染;2.怀疑受到感染,
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    免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术 (immunocytochemistry) 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原 (多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。它是组织化学的分支,它是用标记的特异性抗体 (或抗原) 对组织内抗原 (或抗体) 的分布进行组织和细胞原位检测技术。 一、免疫组化技术的基本原理 应用免疫学及组织
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    什么是细胞转染? 细胞转染(Transfection)是指将外源性基因(如 DNA、RNA、蛋白质等)导入到细胞内的技术。转染的目的是产生重组蛋白,或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。随着基因和蛋白功能的深入研究,转染已经成为科研实验中最常用的技术手段之一。研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。 细胞转染的分类 根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短,可以分为瞬时转染和稳定转染
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    细胞裂解液的目的: (1)利用去垢剂破坏脂质双分子层,破裂细胞; (2)溶解蛋白; (3)蛋白变性使其稳定; (4)抑制蛋白酶活性。 常见的细胞裂解液成分: 50mM Tris-HCl pH7.4 (缓冲体系) 150mM NaCl (等渗体系) 1mM PMSF (蛋白酶抑制剂) 1mM EDTA (变性剂和稳定剂) 5μg/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) 5μg/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) 1% Triton X-100 (弱变性剂) 1% Sodium deoxycholate (中度变性剂和溶解剂) 0.1% SDS (强变性剂和溶解剂) 细胞裂解液的一般
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    提到标准品和对照品,也许还有很多小伙伴并没有真正了解两者的含义和区别,更不能在工作中将两者良好的运用,今天小析姐就汇总了我们工作常见的但是又存在误区的词,这就一定不能漏掉标准品和对照品了,快来看看吧。 1、标准品 对照品与标准品是2个不同的概念,中国药典凡例中已有明确的定义: 对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质,而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准
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    企业概况 恩次方全民防癌中心是一家国家级生物医学高科技企业,专注于细胞再生医学技术研发、生命健康管理以及癌症预防应用。在大健康产业的“产、学、研、教”领域布局,是科学研究和技术服务业的领军企业。 业务领域 恩次方全民防癌中心通过四位一体的布局,首创“细胞+基因”和精准生命系统管理服务体系,业务涵盖干细胞靶向治疗研究成果、癌症预防、细胞储存等多个领域。 创新科技 以科技为引领,恩次方全民防癌中心在细胞再生
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    Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相差不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢? 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20,也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate,中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或
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    1 总述实时荧光定量PCR(后续简称为qPCR)顾名思义就是在PCR反应体系中加入荧光物质,通过荧光信号的实时接收监测PCR反应进程,由于其模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,以此为依据进而达到定量的目的。 简单来讲,qPCR可分为荧光染料法(以SYBR GreenⅠ最常用)与荧光探针法(TaqMan 探针)两种,而其结果分析方法也有绝对定量和相对定量之分。在此不一一赘述,此次分享以SYBR GreenⅠ法为例,结果分析选用相对定量法。 2 实验设计2.1 总
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    细胞迁移(Cell migration):因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound healing assay),是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。 基本原理:在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕/伤口”,划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕/伤口”愈合,于细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并

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