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一步法PCR特点及说明

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BIOG产品特点
◎逆转录和定量PCR在一个反应管内一步完成,操作简便快速;
◎使用化学修饰的热启动聚合酶,反应特异性高,有效避免了非特异扩增;
◎反应缓冲液经充分优化,灵敏度高,最低可检测1pg总RNA中的目标片段,特别适合低拷贝RNA的检测。
◎添加了百代生物RT-PCR专利活素,可明显提升RT-PCR的产量,CT值一般早3-5循环,S型曲线更加典型。
说明:1、BIOGHSC Super Probe Mix包含dNTP Mix和Mg2+,BIOGHSC Super Enzyme Mix包含BIOG超级逆转录酶和BIOG热启动聚合酶、荧光保护素。2、一般来说反应体系中引物终浓度为0.3μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在0.1-1.0μM范围内调整引物浓度。 3、TaqMan探针终浓度可以在0.1μM-0.45μM之间调整。4、qPCR反应灵敏性高,模板量的准确性对结果影响很大,建议将模板适度稀释后加入,或用50µl反应体系。5、模板体积最好不超过反应体积的10%。6、扩增产物长度请选择在100bp-500bp范围内,最好为100-200bp。 7、配制反应体系时,避免震荡混匀,以防气泡产生。8、反应条件:先于42℃逆转录反应15分钟,再于95℃加热5分钟,以激活热启动DNA聚合酶,然后95℃ 15秒,60℃ 35秒,35-40个循环。该反应条件可根据目标片段的大小、引物的Tm值等适当调整。8、如果模板具有复杂二级结构,可将反应温度提高至55℃,有助于提高产量。


1楼2021-06-17 17:02回复