做完WB实验后，讨论心塞结果的时候，比如“为什么做Western blot时没有条带或者条带很弱”这一问题时，我们不得不提及转膜这一关键环节。转膜是Western blot实验中至关重要的步骤，它决定了实验成功与否。其中，对于使用PVDF膜的实验者来说，活化这一步骤显得尤为重要。那么，为什么要对PVDF膜进行活化呢？
去除膜表面残留物：甲醇处理有助于去除膜表面的生产残留物或任何与储存有关的污染物，确保在 Western 过程中更干净、更有效地转移蛋白质。
增加PVDF膜的亲水性：干燥状态的PVDF膜是疏水性的，而预处理的目的是改变其表面特性，使其从疏水性转变为更亲水性。这种亲水性的增加有助于膜吸附水基介质中的蛋白质，使蛋白质更容易接触并附着在膜上，这对于转膜过程中蛋白质的有效捕获至关重要。
经过活化处理，使膜上的醛基转化为羧基，这样才能更好地吸附蛋白质。活化后，打个比方，形成了一种类似于“锚”的结构，牢牢地固定住那些蛋白质，确保它们在穿越过程中不会流失。这样一来，我们就能在最终的实验结果中看到清晰、明显的条带信号。
甲醇可以使PVDF膜的孔隙暂时变小，这有助于防止小分子量蛋白质在转膜过程中穿过膜而丢失。这是由于甲醇的物理和化学特性对PVDF膜孔隙的影响所致。通过与甲醇的接触，PVDF膜的孔隙变小，从而确保了蛋白质的有效转膜和捕获。甲醇会与膜的聚合物产生互动，导致膜的孔隙结构出现变化。
比较常见的判断PVDF膜是否已经被活化的方法有哪些？
观察水珠滴落：将一滴水滴在膜表面上，如果水滴没有流淌开而是呈现球状，这表明膜表面具有一定的激活性。
漂浮实验：将未激活的PVDF膜放入水中，如果膜片沉没表示未激活；如果膜片漂浮在水面上并且表面张力降低，表示膜表面具有激活性。
膜的外观从不透明到半透明。
甲醇处理膜，需要注意的是：应避免长时间浸泡，因为这可能会对膜的性能产生负面影响。NC膜是亲水的，所以不用浸泡直接放buffer里面就行。